Анализ слюны на цитомегаловирус методом ПЦР

ПЦР диагностика слюны на цитомегаловирус

Анализ слюны на цитомегаловирус (CMV) позволяет выявить острую форму инфекции, ее реактивацию и повторное заражение. Исследование проводится методом полимеразной цепной реакции. Обнаружить определенные участки нуклеиновых кислот можно при наличии 100 копий ДНК цитомегаловируса.

Диагностика слюны на цитомегаловирус позволяет назначить специфическую терапию, предупредить осложнения для матери и плода во время беременности.

Когда назначается анализ

ПЦР диагностика цитомегаловируса показана в следующих ситуациях:
  • подготовка к беременности;
  • выкидыши, случаи замершей беременности в анамнезе;
  • признаки внутриутробного инфицирования;
  • иммуносупрессия, ВИЧ-инфекция;
  • увеличение печени и селезенки неясного генеза, лабораторные признаки поражения печени при отсутствии маркеров вирусного гепатита;
  • наличие инфекционного мононуклеоза;
  • невыясненная причина лихорадки;
  • атипичная пневмония у ребенка.

Какое содержание антител к инфекции принято считать нормальным?

Количественное содержание иммуноглобулинов в крови выражают в виде титра. Последний представляет собой максимальное разведение сыворотки крови пациента, при котором реакция является положительной. В лабораторных исследованиях наиболее часто разводят сыворотку кратно 2 (например, 1:2, 1:4, 1:6). Титр не может показать точного числа молекул антител, но демонстрирует общую картину активности антител.

Существует так называемый диагностический титр, который применяют при расшифровке анализов на антитела к ЦМВ. Иммунологические лаборатории располагают различными тестовыми системами. У каждой тест-системы свой уровень чувствительности, а также специфический компонентный состав. Несмотря на такие отличия, все тестовые системы работают на основе принципа иммуноферментного анализа (ИФА).

О результатах исследования при проведении иммуноферментного анализа судят по степени окрашивания раствора (оптической плотности раствора), в который добавлена сыворотка крови исследуемого человека. Полученные пробы сравниваются с имеющимися контрольными образцами.

Методика проведения анализа

Для проведения анализа необходимо собрать около 2-3 мл. слюны в одноразовую стерильную пробирку с крышкой. Отбор материала производят натощак в домашних  условиях. Не рекомендуется полоскать полость рта и чистить зубы перед сбором слюны. Нельзя употреблять спиртные напитки за двое суток до анализа. Исследование проводится до начала приема антибактериальных и противовирусных препаратов.

Образец слюны необходимо доставить в лабораторию в тот же день.

Анализ проводится методом полимеразной цепной реакции и  проводится в амплификаторе после обработки специальными реагентами. Для обнаружения копий фрагмента ДНК цитомегаловируса к полученному материалу добавляют специальные маркеры.

Как расшифровать анализ?

Для выполнения расшифровки анализа необходимо произвести сравнение полученных показателей исследования с данными бланка. Показатели могут исчисляться в различных единицах измерения: УЕ (условных единицах), оптических единицах и так далее. В случаях когда в бланках исследования не указаны показатели, соответствующие норме, лаборатория самостоятельно расшифровывает все полученные данные.

Для определения стадии активности и развития инфекции нужно произвести оценку степени связи антигена и антитела () IgG. Если она невысокая, то это является признаком недавнего заражения (первичной инфекции). Высокая степень авидности характерна для носителей вируса, зараженных уже много лет либо с рождения.

Анализ слюны на цитомегаловирус методом ПЦР

В случае если индекс авидности при анализе на определение авидности IgG к ЦМВ составляет 50-60%, необходимо провести повторное исследование по истечении 2 недель. Такое значение индекса является пороговым, то есть это допустимая норма. При индексе авидности менее 50% говорят о наличии низкоавидных антител, что свидетельствует о первичной инфекции.

Оно представляет собой сочетание иммунологических, молекулярно-биологических методов диагностики:

  • ИФА на IgG, IgM;
  • авидность иммуноглобулина G;
  • ПЦР.

В результатах анализов на определение авидности IgG присутствуют следующие показатели: Ig M, Ig G, авидность, результат ПЦР анализа. Все 4 показателя дают наиболее полную картину наличия или отсутствия вируса в организме человека. Расшифровка анализа следующая:

  1. Когда все перечисленные показатели (Ig M, Ig G, результат ПЦР анализа) отрицательны (авидность при этом не определяют), это говорит о полном отсутствии инфекции.
  2. Если IgM положительно, IgG положительно либо отрицательно, авидность низкая, ПЦР положительно, то инфицирование вирусом первичное. Скорее всего, контакт с вирусом произошел недавно.
  3. IgM положительно либо отрицательно, IgG положительно, авидность на уровне пороговой зоны, ПЦР дал положительный результат. В этой ситуации говорят о поздней стадии первичной инфекции.
  4. IgM отсутствуют, IgG положительно (титр антител высокий), авидность выше порогой зоны, ПЦР отрицательно. Такие результаты исследования свидетельствуют о протекании латентной стадии инфицирования. ЦМВ в настоящее время неактивен, хотя и присутствует в организме.
  5. IgM – результат положительный либо отрицательный, IgG положительно, степень авидности низкая, ПЦР – положительно. Такие показатели свидетельствуют о стадии реактивации цитомегаловируса.

Расшифровка анализа

Цитомегаловирусная инфекция (ЦМВИ) – это инфекционное заболевание, которое вызывает цитомегаловирус или вирус герпеса 5 типа. До 90% населения мира заражено возбудителем болезни и являются бессимптомными носителями. Опасность ЦМВИ представляет для здоровья людей с иммунодефицитными состояниями.

Инфекция у беременной женщины может привести к внутриутробному заражению плода: мертворождаемости, пороком развития, глухоте, снижению остроты зрения, умственной отсталости.

Анализ на цитомегаловирус позволяет выявить заболевание на ранних этапах развития и назначить лечебно-профилактические меры для предупреждения прогрессирования недуга.

Чаще всего заражение ЦМВИ происходит в детском возрасте, но заразиться могут и люди в зрелом возрасте. Пути инфицирования: воздушно-капельный, контактный, гемотрансфузионный, половой, внутриутробный, во время родов. Инкубационный период заболевания составляет 30-60 дней.

В течение инкубационного периода вирус с током крови распространяется по организму, внедряется в клетки тканей внутренних органов, размножается и вызывает их гибель.

Жизнедеятельность вирионов приводит к специфическим микроскопическим измененениям пораженных клеток – увеличение ядра, которое приобретает вид «глаза совы».

Анализ слюны на цитомегаловирус методом ПЦР

В первые дни после внедрения инфекции в организм, иммунная система вырабатывает антитела – иммуноглобулины класса М (IgM). Специфические IgM связываются с антигенами вирусов и обезвреживают их. Антитела присутствуют в крови в течение 1-1,5 месяцев и свидетельствуют об острой стадии болезни.

На 10-14 день после инфицирования синтезируются иммуноглобулины класса G (IgG), которые сохраняются в периферической крови в течение всей жизни. Они обезвреживают вирусы и служат показателем иммунной памяти.

Обнаружение в анализе IgG указывает на перенесенное заболевание и стойкий иммунитет к ЦМВИ.

Первичное инфицирование может протекать без клинических проявлений или маскируется под симптомы длительно протекающего (3-6 недель) ОРЗ.

В тяжелых случаях при угнетении иммунитета развивается генерализованная форма болезни с поражением внутренних органов и нервной системы.

После затихания острой фазы вирус остается в организме в дремлющем состоянии – носительство инфекции. Больной человек или носитель заразен для окружающих.

Несмотря на то, что цитомегаловирус после заражения остается в организме пожизненно, опасность для здоровья в большинстве случаев не представляет.

Анализ на цитомегаловирус необходим людям из группы риска, которые подвержены агрессивному воздействию инфекции на здоровье. Активное размножение вирионов и поражение внутренних органов возникает при угнетении иммунной системы.

Не менее опасно внутриутробное заражение плода, особенно в первом триместре беременности, когда происходит закладка органов и систем.

Группы риска, которым необходимо назначение анализа на цитомегаловирус:

  • женщины в период подготовки к зачатию ребенка;
  • беременные;
  • приобретенные и врожденные иммунодефициты, в том числе ВИЧ/СПИД;
  • прием иммуносупрессивной терапии аутоиммунных заболеваний, после трансплантации органов, в период химиотерапии и лучевой терапии злокачественных опухолей;
  • онкология;
  • новорожденные с внутриутробным заражением ЦМВИ;
  • дети, часто и длительно болеющие простудными заболеваниями и ОРВИ.

При низком уровне защитных сил организма вирус поражает внутренние органы и центральную нервную системы до появления клинических признаков болезни (в инкубационном периоде).

Диагностика ЦМВИ при возникновении симптомов требует длительного лечения и сопряжена с развитием осложнений.

Своевременное выявления инфекции в первые дни после заражения позволяет предупредить прогрессирование болезни и снизить риск нежелательных последствий.

Для выявления инфицирования применяют лабораторную диагностику, которая позволяет обнаружить специфические антитела в крови, генетический материал вируса в различных средах организма, характерные микроскопические изменения в клетках.

Наиболее часто применяемые анализы:

  • ИФА (иммуноферментный анализ);
  • ПЦР (полимеразная цепная реакция);
  • цитология;
  • культуральный метод.

Первичного обследования для обнаружения цитомегаловируса в крови включает ИФА. Остальные методы считают дополнительными для уточнения диагноза и правильной интерпретации анализа.

Серология позволяет обнаружить в крови специфические антитела к цитомегаловирусу – IgM и IgG. Для диагностики заболевания имеет значение следующие показатели:

  • присутствие в крови IgM, IgG;
  • нарастание тира антител в парных сыворотках через 2-3 недели;
  • авидность IgG.

Обнаружение в крови иммуноглобулинов М и G дает информацию о стадии болезни и приобретенном иммунитете. Нарастание титра антител позволяет подтвердить факт первичного заражения или рецидива инфекции.

Серологический анализ крови позволяет обнаружить в крови специфические антитела к цитомегаловирусу – IgM и IgG

Авидность IgG – это способность антител связываться с антигеном (цитомегаловирусом). В начале заболевания авидность низкая (менее 40%) или средняя (40-60%). По мере стихания острой фазы ЦМВИ и приобретения иммунитета, авидность становится высокой (более 60%).

Показатель авидности необходим для определения риска первичного заражения матери для внутриутробного инфицирования плода.

Высокий показатель свидетельствует в пользу инфицирования более, чем 20 недель назад, что значительно снижает вероятность поражения организма плода.

Расшифровка анализа приведена в таблице.

Показатели IgMПоказатели IgGАвидность IgG Интерпретация результатов анализа
отрицательный отрицательный не проводят определение Серонегативный результат. Заражение цитомегаловирусом не было. Специфический иммунитет не выработан. Беременные женщины и больные с иммунодефицитами находятся в группе риска по заражению. Необходимы профилактические меры по предупреждению инфицирования в период вынашивания плода
положительный, нарастание титра антител при повторном исследовании отрицательный, либо положительный, с нарастанием антител при повторном исследовании низкий показатель (менее 40%) первичное инфицирование цитомегаловирусом, во время беременности высокий риск внутриутробного заражения плода
отрицательный, либо положительный с низким титром антител положительный, с постепенным снижением уровня антител до минимального постоянного уровня, который сохраняется в течение жизни средний показатель (40-60%) стадия выздоровления при первичной инфекции или рецидиве болезни, риск для внутриутробного заражения плода сохраняется
отрицательный положительный с постоянным уровнем титра антител высокий уровень (более 60%) латентная стадия течения инфекции (носительство), нет риска для здоровья плода
отрицательный, реже положительный положительный низкий уровень рецидив заболевания, риск для развития плода низкий

Анализ крови на цитомегаловирус методом ИФА назначают женщинам в период планирования зачатия. Если женщина не обследовалась до беременности, то анализ необходимо пройти в первые 4-8 недель после зачатия. Обычно диагностику назначает гинеколог при постановке беременной на учет в женской консультации.

Анализ на цитомегаловирус проводят пациентам пред трансплантацией органов, назначением химиотерапии, лучевой терапии, цитостатиков, глюкокортикоидов. Больные иммунодефицитами регулярно проходят обследование для профилактики прогрессирования болезни. Своевременная диагностика позволяет предупредить развитие осложнений.

Цитомегаловирус: норма в крови и другие аспекты диагностики

Методика ПЦР помогает обнаружить ДНК вируса в крови, слюне, мокроте, моче, соскобах из влагалища и шейки матки, смывов из трахее и бронхов.

Выявление генетического материала возбудителя ЦМВИ в крови указывает на активную фазу болезни – первичном заражении или рецидиве. Присутствие ДНК вируса в других средах считают вариантом носительства и хронического течения заболевания.

Если ДНК не обнаруживают в организме – это негативный результат диагностики, который свидетельствует в пользу отсутствия заражения.

Расшифровку анализов на цитомегаловирус методикой ПЦР проводят с учетом серологической диагностики. Обследование так же проводят беременным женщинам при высоком риске внутриутробного заражения плода. Для этого при помощи амниоцентеза делают забор околоплодных вод и выявляют генетический материал возбудителя. Обнаружение ДНК подтверждает заражение ребенка от матери.

Цитология

Цитологический метод исследования назначают при сомнительных результатах ИФА и ПЦР. Для получения клеток делают биопсию пораженного органа, центрифугируют слюну, мокроту, кровь, делают соскобы из глотки, уретры, цервикального канала. При микроскопии в пользу ЦМВИ свидетельствует увеличение ядра и форма клетки в виде «глаза совы».

Культуральный метод

Посев соскобов и биологических жидкостей на питательные для возбудителя среды называют культуральным методом. Диагностику применяют для подтверждения диагноза, после проведения ИФА и ПЦР. Недостатком исследования является получение результат через 7-10 дней – минимальный срок для роста колоний вируса на питательных средах.

Цитомегаловирус: норма в крови и другие аспекты диагностики

Специальной подготовки к обследованию не требуется. Для анализа делают забор венозной крови натощак – 4-6 часов воздержания от приема пищи. Накануне диагностики не рекомендуют физические и стрессовые нагрузки, употребление алкогольных напитков и жирной пищи. За час до сбора биоматериала следует воздержаться от курения.

Сдача крови на анализ

Своевременное лабораторное обследование при ЦМВИ позволяет провести раннюю диагностику, снизить риск внутриутробного заражения плода, прогрессирования заболевания, развития тяжелых осложнений.

Метод обнаружения цитомегаловируса в организме выбирает лечащий врач согласно тяжести состояния больного и наличия сопутствующих заболеваний. Группам риска необходимо наблюдаться у специалиста и регулярно сдавать анализы для контроля активности инфекции.

Женщинам рекомендуют проходить диагностику до зачатия ребенка.

Цитомегаловирус относится к группе герпевирусов. При попадании в организм он может долгое время находиться в скрытом состоянии и протекать бессимптомно. Наибольшую опасность вирус представляет для беременных и маленьких детей.

Цитомегаловирус: норма в крови и другие аспекты диагностики

Цитомегаловирус – это один из самых распространенных вирусов, который входит в группу семейства герпевируса

Показателем нормы анализа ПЦР является ответ: «в исследуемом образце биоматериала фрагментов цитомегаловируса не обнаружено». Данный результат является отрицательным, который свидетельствующий об отсутствии у пациента вируса герпеса 5 типа.

При положительном результате анализа подтверждается факт клинической симптоматики инфекционно-воспалительного процесса, вызванного цитомегаловирусом.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Все про болезни
Adblock detector